以下主要介绍真核细胞培养时可能遇到的问题,包括可能的原因及对应的解决方案,希望能为大家科研之路提供些许帮助。 1. 细胞培养不贴壁 可能原因: 1)胰蛋白酶消化过度; 2)支原体污染; 3)培养液中无...
密码子、mRNA结构及基因表达优化
密码子优化是基因表达优化的关键步骤之一。其中涉及mRNA二级结构、稀有密码子、核糖体结合位点等关键因素。简单说,基因能否顺利表达蛋白与稀有密码子含量、mRNA结构是否阻碍翻译有很大关系。基因表达优化还...
细胞的稳定转染简介
稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制。对细胞进行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株,稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产、基因编辑、功能研究等方面起着重要...
细胞转染方法比较简介
对哺乳动物细胞转染表达蛋白来说,选择合适的转染方法和转染试剂对转染的成功率起到决定性作用。以下主要列举了瞬时转染和稳定转染的一些方法、原理及适用性,并列举脂质体细胞转染的步骤、注意事项。细胞转染,是指...
包涵体复性注意事项和常见问题解析
一、包涵体复性注意事项1.1最适pH值范围为8.0-9.0之间;1.2温度适宜选择4℃;1.3复性时间一般为24-36小时;1.4低分子化合物 如L-Arg有助于增加复性中间产物的溶解度;脲、盐酸胍、...
原核表达常见问题解析
一、如何知道未知蛋白它有什么特性及其结构?首先,需要确定一件事,那就是这几个蛋白质有人研究过没有?还是最新发现的蛋白质?如果没有人研究过,那就得用先测部分氨基酸,然后设计引物克隆了。如果有人研究过,那...
动物造模——银屑病模型SOP
一、目的:建立实验室动物建模的标准操作规程。二、适用范围:本SOP适应于科沿有道实验室动物实验所有工作人员。三、主体内容:1.实验动物:选取Balb/c小鼠,SPF级别,出生28-35天,雌性。2.实...
病理检测目录及样本要求
蛋白质质谱鉴定简介
一、技术简介:蛋白质(Protein),作为生命的物质基础,是生物体中含量高,功能重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,是生命活动的主要承担者。蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质...
细胞凋亡检测Tunel法简介
一百多年前,人们就在细胞中观察到了自然发生的细胞死亡现象,然而长期以来它都被视为是一种细胞被动现象。随着科学探索的逐渐推进,人们逐渐认识到这一现象并非被动地发生,而是一种主动的细胞行为。如今,细胞凋亡...
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