比较蛋白质组学之SWATH定量分析

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SWATH(Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra)是瑞士苏黎世联邦理工学院的Ruedi Aebersold 博士及其团队与AB-SCIEX联合推出的一项全新的质谱技术。SWATH采集模式将扫描范围划分为以25 Da为间隔的一系列区间,通过超高速扫描来获得扫描范围内全部离子的所有碎片信息,是 MS/MSALL技术的扩展。SWATH技术是一种真正全景式的、高通量的质谱技术,同时也大大提高了定量的可重现性。
一、技术特点:
(1)灵敏度高:SWATH技术利用高分辨率的TripleTOF 5600 +系统,达到了与MRM相当的定量灵敏度;
(2)重复性好:重复样品间的定量相关性可达到0.99以上;
(3)定量准确度高:定量准确度几乎与MRM技术相当;
(4)线性动态范围广:定量范围可跨越4个数量级;
(5)通量大:一次实验可检测到2000种以上蛋白并定量。
 
二、适用范围:
(1)药物作用靶点研究;
(2)疾病标志物筛选;
(3)植物胁迫/抗逆研究;
(4)作用机制研究;
(5)物种蛋白质草图构建;
(6)要求物种含有已完成全基因组测序或转录组测序注释的CDS信息。
 
三、需提供:
(1)需鉴定的样品;
(2)样品信息:需详细说明样品来源、含量、状态及其他基本信息。
 
四、结果交付:
(1)实验报告一份,含具体实验流程及蛋白质组鉴定及定量结果(生物信息学分析)。
(2)生物信息学分析内容包括:
①SWATH参考谱图数据库构建:通过DDA模式的扫描结果,谱图数据库构建、全谱鉴定及结果可靠性评估;
②SWATH定量:根据二级碎片离子的全扫描结果实现二级离子的定量,SWATH结果可靠性分析,差异表达分析,层次聚类,PCA分析等;
③蛋白质功能注释:包括GO注释、COG分类和KEGG Pathway分析;
④差异蛋白功能富集:包括GO富集、Pathway富集;
⑤差异蛋白网络互作:基于STRING 数据库的PPI分析,基于Cytoscape的可视化展示。
 
五、实验周期:
自送样起50个工作日。

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  • 本文由 hjg 发表于 2024年12月24日 20:53:15
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