对哺乳动物细胞转染表达蛋白来说，选择合适的转染方法和转染试剂对转染的成功率起到决定性作用。以下主要列举了瞬时转染和稳定转染的一些方法、原理及适用性，并列举脂质体细胞转染的步骤、注意事项。
细胞转染，是指将外源基因导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法）、生物介导（病毒介导转染、原生质体转染）。
理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。目前实验室常用的转染方法有脂质体转染，阳离子聚合物转染和病毒转染，不同的转染方法各有利弊，针对细胞的习性和不同的实验目的选择相对合适的转染方法。下面列举了一些常用转染方法的原理，优缺点和适用性:
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细胞转染方法
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细胞转染原理
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主要特点 |
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阳离子脂质体转染法
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带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA结合形成DNA-脂质体复合物，然后通过细胞的内吞作用进入细胞 |
a)操作简便
b)适用于各种裸露的DNA和RNA片段
c)适合转染各种的细胞
d)对DNA浓度有一定要求
e)对细胞有一定的毒性 |
瞬时转染
稳定转染
所有细胞 |
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阳离子聚合物
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带正电的阳离子聚合物与核酸的磷酸基团形成带正电的复合物，复合物和带负电的细胞膜接触，并通过内吞作用进入细胞 |
与脂质体转染法类似，但是具有很低的毒性，操作简单，适用性广，是新一代转染试剂 |
瞬时转染
稳定转染
所有细胞 |
| 磷酸钙法 |
磷酸钙能够促进外源DNA和细胞的结合，磷酸钙-DNA复合物能够附着到细胞表面，并通过内吞作用进入细胞 |
a)操作简单b)对DNA浓度要求高c)适用性有局限（不适用于原代细胞） |
瞬时转染
稳定转染 |
| 电穿孔法 |
高脉冲的电压破坏细胞膜，在细胞膜表面形成孔道，DNA通过孔道进入细胞 |
a)适用性广，适用于质粒和几十kb的基因组片段
b)针对不同细胞要优化实验条件
c)细胞致死率较高 |
瞬时转染
稳定转染
所有细胞 |
| 显微注射法 |
利用显微操作系统和显微注射技术将DNA直接注入到细胞中 |
a)整合率较高，适用于工程改造和转基因动物的建立
b)操作复杂，且需要昂贵精密的设备
c)外源基因的整合位点和拷贝数无法控制，会导致片段缺失、突变 |
瞬时转染
稳定转染 |
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逆转录病毒转染
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通过病毒的膜蛋白和细胞表面的受体相互作用而进入细胞，利用宿主细胞酶自行转录复制合成DNA，并随机整合到细胞基因组中 |
a)转染效率高，适用于难转染细胞转染
b)利用病毒介导转染，外源基因整合较稳定
c)逆转录病毒只选择感染分裂细胞
d)容纳外源基因长度<8kb |
稳定转染
特定细胞转染 |
1、细胞培养：细胞铺板，加入一定量的细胞培养液，37℃二氧化碳培养箱中培养，待细胞密度生长至80-90%时，准备转染。
2、在EP管中，加入无血清稀释的转染试剂，室温放置5min
3、在EP管中，加入无血清培养基稀释的DNA，室温放置
4、5min，并将二三步得到的两物质混合得到C液，轻轻混匀，室温下放置15-30min。
5、用无血清培养基将细胞洗涤两次，在细胞中加入适量的无血清培养基
6、将混合得到的C液缓缓加入到细胞中，摇匀，在37℃的二氧化碳培养箱中培养6-24小时。
7、细胞培养6-24小时后，吸去无血清转染液，加入正常培养液继续培养。
1、转染是不能使用含有血清的培养液，血清对转染效率影响很大。
2、转染前铺板时用无双抗培养基，抗性的增加会影响转染效率。
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