我们总结了免疫组化实验的常见问题及解决方案，在此分享出来，让大家的免疫组化实验更加顺畅。
下图样本是正常人肝血管组织，目标蛋白是α-平滑机动蛋白，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，在红圈处并没有检测到抗原。
| 可能原因 |
解决办法 |
| 缺乏抗原 |
做Western blot检测目标蛋白是否有表达或原位杂交检测mRNA是否有表达 |
| 抗体无效 |
避免反复冻融；用阳性片子进行检测 |
| 抗原修复无效 |
改进抗原修复方法 |
| 抗原-抗体结合不足 |
加大一抗浓度，增加孵育时间 |
| 抗体不能穿过细胞 |
加Triton x-100到封闭液中，通透组织 |
下图样本是小鼠皮下移植瘤组织，目标蛋白LYVE1，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，B图背景高。
| 可能原因 |
解决办法 |
| 脱蜡不足 |
适当延长二甲苯浸泡次数和时间 |
| 干片，组织过于干燥 |
避免干片 |
| 抗原修复过度 |
减少修复时间 |
| 内源性酶干扰 |
添加淬灭操作 |
| Fc受体干扰 |
用二抗来源的血清取代BSA封闭 |
| 抗体浓度过高 |
适当增加稀释比例 |
| 染色时间过长 |
镜检观察显色，合适的时候终止显色 |
下图样本是人小肠粘膜组织，目标蛋白IL-10，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，在与A图相同位置的B图中没有检测到抗原，反而在组织边缘检测到组织表达。
| 可能原因 |
解决办法 |
| 通透作用破坏了膜 |
去除缓冲液中的通透剂 |
| 固定的方法对抗原不合适 |
尝试不同的固定剂，关于固定剂的使用选择见补充材料 |
| 没有及时固定引起抗原扩散 |
取材后立即固定 |
通过以上的介绍，希望大家对于免疫组化实验能有更深的理解，目前科沿有道生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行免疫组化检测。
如果您有实验的需求，只需要提供相应的组织标本、一抗即可，科沿有道生物将提供详细的试验流程报告、实验图片、实验数据，并返还相应的实验材料(蜡块、切片等)，如果您的实验出现问题，也可以随时咨询。
北京科沿有道生物科技有限公司，专注于生命科学最前沿科研技术服务，具有较好的生物学和医学技术服务平台，能够提供实验课题设计、论文编辑润色，以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
科沿有道秉承“客户为先，服务至上”的经营理念，以一切为了客户的利益为宗旨，努力为广大客户提供最优质、高效的服务，科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任，相信在未来的工作中，科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。
评论