酶联免疫吸附测定（ Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA），是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。目前已广泛应用于临床检测及研究领域。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定样品中的抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。
科沿有道提供的ELISA服务：1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
二、ELISA样本的采集与保存：
准确称取动物组织重量按重量(mg)：体积(ul)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。
全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于2-8℃ 3000转/分离心15min，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。
可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃3000转/分离心15min，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。
贴壁细胞：将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。
悬浮细胞：将培养液3000转/分，离心10min。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。
细胞上清：标本于2-8℃，3000转/分离心15min取上清，上清立即用于实验，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。
按试剂盒说明书进行操作，不同指标操作不一样。具体以订购的试剂盒说明书为准。基本步骤如下：
1.包被：用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1-10μg／ml。在聚苯乙烯酶标板的每孔加100μl，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min。（一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，此步骤可省略）
2.封闭：每孔加入200ul封闭液，37℃孵育1-2 h。
3.洗涤：小心揭掉封板膜，放入洗板机，洗涤3-5遍。也可以手动洗板：弃去液体，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水纸上拍干，重复3-5遍。（一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，前三个步骤可省略）
4.加样：加适当稀释的待检样品100μl于上述已包被的反应孔中。(同时做空白孔，倍比稀释的标准品孔，有条件可加做阴性对照孔及阳性对照孔作为质控点)。
7.加抗体：于各孔中加稀释好的生物素化抗体工作液100 μl。
10.加酶结合物：于各孔中加稀释好的酶结合物工作液100 μl。
11.温育：用封板膜封板后置37℃避光孵育30 min。
13.加显色底物：于各孔中加入TMB底物溶液100 μl，37℃避光反应10～30min，直到倍比稀释的标准品孔出现明显的颜色梯度为止。
14.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸100 μl，颜色由蓝色变为黄色。
15.结果测定：10min内，在酶标仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。
根据标准品的浓度和OD值做标准曲线，然后根据标准曲线方程计算出样本浓度。
北京科沿有道生物科技有限公司，专注于生命科学最前沿科研技术服务，具有较好的生物学和医学技术服务平台，能够提供实验课题设计、论文编辑润色，以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
科沿有道秉承“客户为先，服务至上”的经营理念，以一切为了客户的利益为宗旨，努力为广大客户提供最优质、高效的服务，科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任，相信在未来的工作中，科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。
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