通过 MTT法可以得到细胞的生长曲线，也可对瞬时转染后的细胞进行检测，以下主要介绍MTT 的作用原理及实验操作要点。
MTT 全称 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名为：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT 主要有两个作用：① 药物（或其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定（如细胞瞬时转染表达后可对细胞进行 MTT 检测）；② 用于细胞增殖及细胞活性的测定，可以制得细胞生长曲线。
MTT 法检测细胞存活和生长的主要机理是：活细胞中的某些物质（线粒体中的琥珀酸脱氢酶）能够和 MTT 反应，使 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞没有此功能。DMSO（二甲基亚砜）能够将此结晶（蓝紫色甲瓒）溶解，在酶联免疫检测仪 490nm 波长处测定其吸光值，能够间接的反应活细胞的数量。一定范围内，蓝紫色结晶沉淀的数量与细胞数成正比。目前 MTT 法因其灵敏度高，经济快速等优势被广泛的运用于细胞毒性试验，肿瘤药物的筛选、放射敏感性测定和对某些生物活性因子的活性检测等方面。
MTT 法也有自身的缺点，如 MTT 检测生产的蓝紫色产物（甲瓒）不溶于水，需被溶解后才能检测。一方面使得工作量增加，另一方面对实验结果的准确性产生一定的影响，且用于溶解甲瓒的有机溶剂对人体有一定的危害。细胞瞬时转染表达后的细胞也可做 MTT 实验，多数人不知道是先转染再做MTT，还是先做MTT 再进行瞬时转染，这里建议是先做转染，培养一段时间后（24/48h），重新接种至 96 孔板，加药两天左右，再进行 MTT 检测。
仪器：酶联免疫检测仪，血球计数板，96 孔板，离心管等
试剂：MTT 溶液，胰蛋白酶，DMSO（二甲基亚砜），血清培养基
用PBS缓冲液溶解MTT 粉末。PBS（ph=7.4）配置：Nacl（8g）+Kcl（0.2g）+Na2HPO4（1.44g）+KH2PO4（0.24g）调pH7.4,定容至1L。
此处MTT的浓度为：5mg/ml。称取0.5克MTT粉末，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）中，用0.22μm滤膜过滤除去溶液里的细菌。在配制和保存的过程中，最好避光。如在超净台中配置该溶液，可将日关灯关掉操作，同时容器用铝箔纸包住(避光)，4℃避光保存即可。使用勿超过两周，一旦MTT变色，即刻停止使用。建议是MTT最好现用现配，分装一定量的MTT 粉末在EP管中，用的时候现配直接加到细胞培养板中操作方便也避免浪费。
此外，MTT具有致癌性，无论是配置还是实验都要注意做好防护准备。MTT 对菌敏感，配置或保存的时候要保证无菌，且要避光。
在进行实验时，由于实验作用时间较短，因此可不避光，但是要将超净台的日光灯关掉，效果会更好。
1、常规消化细胞，离心收集细胞沉淀，用血清培养基悬浮细胞，制成单细胞悬液，并用进行细胞计数；
2、接种细胞：稀释细胞浓度至 1x104 /ml。吸取 200ul 的细胞悬液加入到 96 孔板中（注意设置空白对照组）；
3、对于瞬时转染的细胞，转染后 24h 消化细胞，重新接种至 96 孔板，培养 18h 加药两天后进行 MTT 检测；
5、呈色：从细胞培养第二天开始，即可每天按照固定时间取出 96 孔板并加入 MTT 溶液 20ul，37℃培养 4h后，将孔中上清小心的吸去，加入 150ul 的 DMSO，震荡 10min，使沉淀充分溶解；
6、在酶联免疫检测仪上设置 490nm 波长测定吸光值，进行检测并记录结果（取平均值）；
8、以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
绘制结果应当呈现 S 形。与细胞培养计数法获得的生长曲线接近。前三天左右为停滞期，随后细胞进入对数生长期，最后进入稳定生长时期。
因为在相同体积内细胞数与吸光度成正比，所以在对数生长时期，曲线越倾斜（斜率越大），细胞的群体倍增时间越短。
1、实验设置空白对照组，步骤保持一致，一组只加培养基不加细胞，比色以空白调零。
2、MTT 实验吸光度最后在 0-0.7 之间，超出这个范围则不是直线关系。
3、加 DMSO 之前要尽量去掉培养液，便于 DMSO 溶解甲瓒颗粒进行比色测定实验中使用各培养基的量，按照说明书操作（根据经验适时调整）。
4、每孔细胞浓度维持在 20 个/ul，加 20ul MTT，作用四小时后洗掉上清液。注意不要将甲瓒洗掉，然后每孔加 150ul DMSO，振荡 10 分钟，然后测吸光值。
5、细胞瞬转 MTT 检测，转染 6h，24h 或 48h 消化细胞进行重新接种，此时间根据细胞生长状态决定，一般在加药 2 天后进行 MTT 检测。
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