免疫电镜技术也称免疫细胞化学技术,是由免疫化学技术与电镜技术相结合的一种实验技术手段,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。抗原、抗体的相互作用是免疫化学反应的基础,它具有高度的特异性,结合电镜的高分辨和放大特点,可以在超微结构和分子水平上研究各种组织和细胞内的免疫反应,并能精确定性、定位和半定量,使形态与机能紧密结合。
目前免疫电镜主要分为有标记物和无标记物两大类。无标记物类的常用方法为免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察。有标记物类,最早由Singer在1959年建立的铁蛋白(ferritin)标记抗体技术;后由Nakane和Pierce在1968年建立的酶标记抗体技术;以及由Faulk和Taylor在1971年建立的胶体金标记技术。
该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子显微镜下观察,由于标准物形成一定的电子密度而指示出相应抗原所在的部位。免疫电镜的应用,使得抗原和抗体定位的研究进入到亚细胞的水平。
免疫电镜样本准备方法及要求:
一、动物组织样本
组织取下后立即投入免疫电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输。样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验,减少抗原丢失的可能性。
1-3min内取样,取样组织1mm3大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液的培养皿,将小组织块离体取下后立即投入培养皿内,用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm3的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的EP管内继续固定。
取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。
二、细胞样本
1、贴壁细胞:
①培养好的细胞弃培养基,加入免疫电镜固定液。
②常温固定5min左右,用细胞刮(或软橡胶盖切得平整小方块)沿一个方向轻轻刮下细胞,切记不要反复刮,避免细胞刮破。
③用巴氏吸管把细胞液吸入离心管内,放入离心机1000转离心2min左右,弃固定液后加新的免疫电镜固定液,把细胞团轻轻挑起,悬浮于固定液中。
④室温避光固定30min,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输。
2、悬浮细胞:离心收集细胞要肉眼可见,弃培养基后加免疫电镜固定液室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输。
三、细菌样本
收集细菌放于免疫电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输。
四、病毒
破碎组织细胞,粗离心去除细胞碎片取上清,超速离心分离出病毒(病毒提取的过程需要客户自己完成)。用缓冲液(如PBS)悬浮病毒,远距离-80℃冻存运输,近距离4℃保存运输。
五、外泌体囊泡等
客户自己完成外泌体囊泡等的提取收集,用缓冲液(如PBS)或者试剂盒中的保存液悬浮,远距离-80℃冻存运输,近距离4℃保存运输,尽快制片做免疫标记后及时电镜观察拍照。

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