双萤光素酶报告基因检测

简介：

双报告基因常用于实验系统中相关的或成比例的检测，一般一个报告基因作为内对照，使得另一个报告基因的检测均一化。报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或者与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。通过该方法，可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，例如培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等。

科沿有道采用萤火虫萤光素酶(Firefly Luciferase)和海肾萤光素酶(Rellina Luciferase)组成双萤光素酶报告基因实验系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通过特定的萤光素酶底物，萤光素酶与底物反应过程中会发出生物萤光，然后通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物萤光，从而比较不同组间基因表达的差异。

实验应用：

1、miRNA与靶基因3’UTR的靶向关系；

2、转录因子/启动子活性研究；

实验流程：

1、重组质粒构建: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒;

2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞;

3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，可设置不同的检测时间点检测；

4、外界干预: 转染后，可选择性进行物理/化学/病毒等的相应刺激;

5、细胞处理: 采用双萤光素酶检测试剂盒依照protocol操作;

6、萤光检测: 使用酶标仪进行萤光强度检测；

7、数据整理，结果分析。

客户提供信息：

1、预测的启动子或miRNA序列信息及结合位点;

2、靶基因信息;

3、载体选择;

4、实验分组等细节;

5、其他实验需求说明。

科沿有道可供选择的载体：

样本寄送须知：

1、活细胞：一定要用不透气方瓶邮寄，常温;

2、冻存细胞：纯干冰件，保证干冰充足

3、质粒、miRNA等-20℃寄送

交付结果：

实验报告，原始结果，分析结果

实验周期：

4-6周左右