流式细胞凋亡

流式细胞凋亡

实验介绍：

细胞凋亡通常称为细胞程序性死亡，是由基因控制的主动性细胞死亡过程，Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白，可以与早期凋亡细胞的胞膜结合，而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。

在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。由于在发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变，因此，与DNA碎片检测比较，使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用，来区分凋亡细胞(Annexin V /核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V /核酸染料 )。

实验应用：

（1）癌症研究：细胞凋亡是正常细胞生命周期的重要过程，而癌细胞常失去了凋亡能力。通过流式细胞凋亡检测，可以评估癌细胞的凋亡水平，了解癌细胞的生长和死亡特性，从而研究癌症的发展机制，并寻找新的治疗方法。

（2）药物筛选：流式细胞凋亡检测可以用于筛选和评估药物的抗癌活性和诱导细胞凋亡的效果。通过测量细胞凋亡的比例和程度，可以评估药物对癌细胞的抗肿瘤效果，从而指导药物研发和临床治疗。

（3）免疫学研究：细胞凋亡在免疫应答中起着重要作用。通过流式细胞凋亡检测，可以研究免疫细胞的凋亡机制，评估免疫细胞的活性和功能，了解免疫调节的过程和效果。

（4）神经科学研究：细胞凋亡在神经系统发育和疾病中起着重要作用。通过流式细胞凋亡检测，可以研究神经细胞的凋亡机制，评估神经细胞的存活和死亡特性，从而了解神经系统的发育和疾病机制。

（5）细胞治疗监测：在细胞治疗过程中，流式细胞凋亡检测可以用于监测细胞的生存和凋亡状态，评估细胞治疗的效果和安全性。

总之，流式细胞凋亡检测的应用广泛，涉及到癌症研究、药物筛选、免疫学研究、神经科学研究和细胞治疗监测等多个领域。

实验步骤：

（1）细胞培养结束后，离心收集细胞，弃上清，加PBS清洗3-5次；

（2）按照Annexinv-apc/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒操作说名进行实验：

A.  加入500μl Binding Buffer，重悬细胞；

B.  5μl Annexinv-apc/7-AAD混匀后加入5μl 7-AAD，混匀；

C.  室温避光反应5-15min（同时设阴性对照，即正常细胞不加AnnexinV-APC和7-AAD；阳性对照1，以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照，只加5μl AnnexinV-APC单标；阳性对照2，以凋亡效果最明显的溶剂组作为阳性对照，只加5μl 7-AAD单标）；

（3）流式细胞仪上机检测。

案例图片：