爪蟾卵母细胞电压钳检测

实验介绍：

电压钳（voltageclamp）又叫电压钳制或电压固定，该技术由Cole和Marment设计，后经Hodgkin和Huxley改进并成功地应用于神经纤维动作电位的研究。

其设计原理是根据离子作跨膜移动时形成了跨膜离子电流（I），而通透性即离子通过膜的难易程度，其膜电阻（R）的倒数，也就是膜电导（G）。因此，膜对某种离子通透性增大时，实际上时膜电阻变小，即膜对该离子的电导加大。根据欧姆定律V=IR，即I=V/R=VG，所以，只要固定膜两侧电位差（V）时，测出的跨膜电流（I）的变化，就可作为膜电导变化的度量，即可了解膜通透性的改变情况。

卵母细胞表达体系优点：

（1）异源表达其他物种通道蛋白，不受其他物种另外蛋白以及电源的影响，利于单独研究此蛋白功能；

（2）量多且获得率高，爪蟾也不需处死，可以反复使用；

（3）卵母细胞体外培养方法简单，且可以异源表达其他各类物种的基因；

（4）表达简单，不用像其他动物、植物物种需要进行载体转化，直接注射RNA进入卵母细胞的细胞质中即可表达；

卵母细胞体积大，本身离子通道较少，对研究影响较小；

实验应用：

目前电压钳技术在爪蟾卵母细胞中应该得非常成熟，成为研究各种离子通道蛋白或者转运体蛋白的重要技术，其中水通道蛋白、K离子通道蛋白、Na离子通道蛋白、糖转运蛋白、氨基酸转运蛋白以及一些气味受体均可用此技术进行机制研究。

实验步骤：

（1）目标基因序列确定；

（2）体外转录载体构建；

（3）体外转录cRNA以及纯化；

（4）卵母细胞提取培养；

（5）cRNA显微注射卵母细胞；

（6）特殊物质溶液灌流，电压钳记录电流。

案例图片