RIP常见问题与解答

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一、什么是RIP?
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀)主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,可以帮助我们发现miRNA 的调节靶点。
根据需求,科沿有道可以提供RNA/蛋白、RNA/RNA互作验证RIP技术服务。

RIP常见问题与解答

二、做RIP,需提供什么,可获得什么结果?
RIP技术服务,需要客户提供目的蛋白抗体(可用于IP)及其说明书;需检测的细胞样品;目的基因、目的蛋白信息。
实验完成后,科沿有道所交付的结果包含:原始数据、结果图片(包括阴性对照结果);标准实验报告(包括详细的材料与方法);SCI标准Result Figure。
三、RIP试验主要应用哪些方面?
1) 已知蛋白与已知RNA互作QPCR验证;已知蛋白与未知RNA互作二代测序筛选。
2) 已知RNA与已知RNA互作QPCR验证;已知RNA与未知RNA互作二代测序筛选。
四、RIP试验需要注意些什么?
1) 防止RNA与蛋白非特异性结合。
2) 避免RNA蛋白质结合被破坏。
3) 避免外源RNase污染。
4) 抑制内源RNase的活性。
5) 避免RNA结合蛋白的降解;
6) 选择适合做RIP的抗体,一定要是IP级别的抗体。
7) 细胞的选择,对于需要做转染实验的需要选择转染效率较高的、RNA在细胞中本底表达量要相对较高的。
五、为什么抗体无法沉淀RIP裂解液中的目标蛋白?
1) 先进行IP或者WB,测试抗体可以与目标RBP结合。
2) 另选一个能与抗原其他表位结合的抗体。
3) 尽可能选用密理博RIPAb+抗体。
4) 稀释抗体成浓度梯度,进行IP测试。
5) 4℃过夜孵育抗体与RIP裂解液。
6) 确定抗体类型与Protein A/Protein G匹配。
六、RIP可以分提核浆的RNA-蛋白质复合物吗?
理论上,可以采用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit先分离样本,再进行RIP实验。但需要特别注意的是所用kit中的reagent不能有RNase和DNase,以及要能与下游的抗体beads孵育兼容。 

北京科沿有道生物科技有限公司,专注于生命科学最前沿科研技术服务,具有较好的生物学和医学技术服务平台,能够提供实验课题设计、论文编辑润色,以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
科沿有道秉承“客户为先,服务至上”的经营理念,以一切为了客户的利益为宗旨,努力为广大客户提供最优质、高效的服务,科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任,相信在未来的工作中,科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。
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  • 本文由 hjg 发表于 2024年12月25日 10:47:24
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