免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法,属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。
免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员,那么利用这种蛋白的特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来(常说的“pull-down”),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。免疫共沉淀的特点可以概括为两点,第一是天然状态,第二是蛋白复合物。
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1、相互作用的蛋白处于天然状态,都是经过翻译后修饰的;
2、可以分离得到天然状态下的相互作用蛋白复合物;
3、可以检测体外和细胞内的相互作用。 |
1、检测不到弱亲和力和瞬时的蛋白相互作用;
2、蛋白的相互作用可能不是两者直接结合,可能存在第三方的桥梁作用;
3、须在实验前预测目的蛋白,以选择最后检测的抗体,否则实验得不到结果;
4、假阳性率较高,试验需要设置正确的对照。 |
科沿有道提供免疫共沉淀(CO-IP)检测服务。可对两种已知蛋白是否存在相互作用进行验证,也可以验证在总蛋白中是否含有与已知蛋白相互作用的未知蛋白。其实验方法为将靶蛋白(X)与目的蛋白(Y)在同一细胞内孵育,形成“靶蛋白-目的蛋白”复合物。将靶蛋白的特异性抗体与复合物共孵育,形成“抗体-靶蛋白-目的蛋白”复合物,利用Proterin A/G纯化。通过SDS-PAGE银染,结合Western Blot等对两种蛋白之间是否存在相互作用进行定性分析。
交付内容:相互作用分析报告(包括SDS-PAGE结果、WB结果等)
免疫共沉淀实验流程为:收集蛋白样品—诱饵蛋白抗体沉淀诱饵蛋白—SDS-PAGE分离蛋白—WB检测是否存在靶蛋白。
直接提供蛋白样品:动植物组织/器官或含有诱饵蛋白及目标蛋白的裂解液;
提供表达质粒:质粒需测序验证,提供测序峰图,防止基因模板或表达质粒本身碱基突变,造成实验延误;
提供基因序列:客户提供序列,由德泰负责诱饵蛋白或目标蛋白的表达。
科沿有道提供:如实验室库存有符合条件抗体可提供使用,或也可代购。
北京科沿有道生物科技有限公司,专注于生命科学最前沿科研技术服务,具有较好的生物学和医学技术服务平台,能够提供实验课题设计、论文编辑润色,以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
科沿有道秉承“客户为先,服务至上”的经营理念,以一切为了客户的利益为宗旨,努力为广大客户提供最优质、高效的服务,科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任,相信在未来的工作中,科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。
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