外泌体提取鉴定

实验介绍：

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。

外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式：一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而激活靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中，外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而激活细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。

针对外泌体中相关基因表达情况以及所参与的调控机制目前研究比较多，一般提取外泌体后均需要做WB、电镜鉴定；

实验应用：

（1）外泌体成分分析：可以通过质谱、蛋白质组学、核酸测序等技术对外泌体的成分进行分析，了解其包含的蛋白质、核酸、脂质等分子组成，从而揭示外泌体的功能和调控机制。

（2）信号传递研究：外泌体可以通过包裹的膜蛋白、miRNA、mRNA等分子向受体细胞传递信号。可以利用提取的外泌体进行细胞实验研究细胞间相互作用的机制，如细胞间的信号传导、细胞增殖和分化等。

（3）疾病诊断与预测：外泌体中的蛋白质、miRNA、DNA等分子可以作为潜在的生物标志物，用于疾病的早期诊断、预测和监测。通过外泌体的分析，可以发现疾病相关的分子变化，为疾病的诊断和治疗提供依据。

（4）肿瘤生物学研究：外泌体在肿瘤发生、进展和转移过程中起着重要作用。可以利用外泌体进行肿瘤细胞间的信息传递研究，探索肿瘤细胞与肿瘤微环境之间的相互作用，为肿瘤的治疗和预防提供新的靶点。

（5）药物传递研究：外泌体可以作为一种潜在的药物传递系统，将药物封装在外泌体中，通过外泌体传递到目标细胞，提高药物的传递效率和药效。可以研究外泌体的药物传递机制，开发新的靶向药物传递系统。

总的来说，外泌体具有广泛的研究应用，可以用于疾病诊断、疾病机制研究、信号传递研究、药物传递等领域。

实验步骤：（试剂盒方法）

（1）收集上清、血清、或者血浆，去除其他杂质；

（2）加入外泌体提取沉淀剂，每250ml样本加入63ul沉淀剂，充分混匀后4℃静置30min；

（3）4℃下离心30min，弃去上清保留沉淀，加入100-500ul PBS溶解外泌体沉淀，-80℃保存；