亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法,其原理为:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。
基因组DNA经亚硫酸盐处理后,设计BSP引物扩增目的片段,此时尿嘧啶(U)全部转化为胸腺嘧啶(T),最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。
一、技术优势:
(1)检测序列长,可长达200-400bp;
(2)分辨率高,可检测到每一个碱基的甲基化状况;
(3)对于样品要求低,适用于新鲜、冷冻和FFPE样本。
二、服务内容:
(1)基因组DNA的Bisulfite转化;
(2)BSP(Bisulfite Sequencing PCR)法,包括引物设计与合成,TA克隆测序及数据分析。
三、样品要求:
(1)若提供基因组DNA,需≥2μg;
(2)若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料,需提供足够提取2μg以上基因DNA的材料量;
(3)基于所选择的DNA甲基化检测方法,需提供相应的引物或引物序列。
四、BSP服务完成时提供:
(1)Bisulfite处理的基因组DNA;
(2)实验报告(包括BSP产物的直接测序报告);
(3)5个有效的阳性克隆;
(4)空点图。
五、结果展示:
(1)BSP测序图:
(2)BSP点状图和BSP序列比对:
(3)BSP柱状图:
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