常规组织脱水与石蜡包埋

一、取材与固定：

切取组织时应使用锋利的刀、剪，切取组织块时，从刀的根部开始向后拉动切开组织。组织块的厚度约为0.2~0.3cm，大小为1.5cm x 1.5cm x 0.3cm为宜。取好的组织块用10%缓冲中性福尔马林（甲醛）液固定24~48h。

10%福尔马林（甲醛）：100ml甲醛+900ml水。

10%缓冲中性福尔马林（甲醛）液：100ml甲醛+900ml水+4gNaH₂PO₄+6.5gNa₂HPO₄。

NBF另一配方：50ml甲醛+450ml水+8.18425gNa₂HPO₄*12H₂O+2.2666gNa₂HPO*2H₂O

10%中性福尔马林（甲醛）液：100ml甲醛+900ml水+碳酸钙加至饱和 (以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

固定液的用量一般为组织体积的10~20倍，容器不要过小，材料也不要太多；应避免组织紧贴瓶底或瓶壁，以免影响固定液的渗入。

二、水洗：

固定后的组织块的冲洗，一般情况下是置水龙头下以自来水流水冲洗，这样可以使组织中的固定液随时溢出，洗得更干净彻底，有些还需要进行特殊的洗涤。

各种以水配制的固定液如甲醛，都须用流水冲洗，大块组织一般冲洗24小时，小块组织一般冲洗2~10小时。

固定液为多聚甲醛时，用于免疫组织化学等特殊染色的应将组织投入PB缓冲液中，每60分钟更新洗涤液一次，累计6小时。冲洗好的组织可存放在75%酒精内。

三、脱水：

从30％乙醇开始，经过50％、70％、80％、95％、100％至完全脱水。一般各级乙醇中放置45min到1h。

脱水须在有盖瓶中进行，以防止高浓度乙醇吸收空气中水分导致浓度降低而使脱水不彻底。需要保存的材料可脱水至70%乙醇时停留其中，如需长期保存，可加入等量的甘油。

四、透明：

二甲苯作用较快，透明力强，但组织块在其中停留过久，容易收缩变脆变硬，同时若脱水不净，就会引起不良后果，在应用时须特别小心。通常将组织块先经纯乙醇与二甲苯的等体积混合液，再进入纯二甲苯，这样可减少上述的缺点。

透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在30min至2h，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过3h为宜。材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状，说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分，并保持其无水状态。

五、透腊：

透蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石蜡熔点3度，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理。纯石蜡应处理2～3次，透蜡的时间依材料性质而定，一般每次需15～30min。

在60度恒温蜡箱中放置3个蜡杯，分别编号1（52℃~54℃）、2（52℃~54℃，或54℃~56℃）、3（56℃~58℃），其中分别盛软蜡、软蜡、硬蜡，取透明好的组织块放入软蜡中各1小时，迅速取出放入硬蜡，如果时间来及包埋，可以将已经完成浸蜡的组织块取出放在温箱外，第二天继续。

六、包埋：

包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。具体做法是：先准备好纸盒，将熔蜡倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，再轻轻提起纸盒，平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。

包埋用蜡的温度应略高于透蜡温度，保证组织块与周围石蜡完全融为一体。石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。以后切片时引起碎裂。

①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。包埋用过的石蜡可以反复使用。

②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。

③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。

④在金属框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。可室温下冷却。

⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其凝固。

⑥待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架，或拆开纸盒，取出蜡块。

七、切片：

展片、捞片和贴片。

八、烤片：

展好的切片在室温下稍微干燥后，放在40℃恒温烤箱中，小片组织30分钟即可，大的需12~24小时，烤干备用。