病理染色实验——免疫荧光染色
实验介绍
免疫荧光单标标记即利用抗原抗体特异性结合原理,在一张切片上的一个抗原进行荧光标记,从而实现定位,定性,半定量的分析,由于抗体的种属来源不同还可以做免疫荧光双标或者三标染色,根据免疫荧光多标染色试剂盒方法可以最多做到七色。
实验步骤
(1)用4%的多聚甲醛固定细胞爬片15min, PBS浸洗玻片3次;
(2)在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;
(4)滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;
(5)加荧光二抗: 滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次;
(6)复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;
(7)用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察。
实验案例



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