分子互作之核酸与核酸互作

miRNA可以与mRNA结合调节体内基因的表达,通过影响蛋白的表达、修饰、酶活性等来调节生命活动的进行。lncRNA作为体内的ceRNA,可以与miRNA结合起到调节基因表达的作用。研究lncRNA与miRNA的相互作用对于研究生命具有重要的意义。通过MS2-RIP和灵敏度更高的双荧光素酶技术,来研究lncRNA和miRNA的相互作用。
 
一、MS2-RIP
MS2-RIP技术主要是应用针对GFP抗体的Protein G磁珠把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或者测序分析。
 
1.1实验流程:
(1)载体构建及转染;
(2)细胞裂解液获取及磁珠的准备;
(3)RNA结合蛋白免疫沉淀;
(4)RNA纯化;
(5)RNA反转录及cDNA验证;
(6)数据分析。
 
1.2实验例图: 

分子互作之核酸与核酸互作

图. MS2- RIP实验原理图(表达Lnc-A的质粒富集miRNA1miRNA2的效率比不表达Lnc-A的MS2组明显提高。通过对照,说明MS2-A可以与miRNA1和miRNA2相互结合)
 
二、双荧光素酶报告系统
双荧光素酶报告基因通常是一个报告基因作为内对照,使另一个报告基因的检测均一化。科沿有道应用Promega公司的双荧光素酶报告基因检测(DLR)系统,提供DLR检测服务。
 
2.1实验流程:
(1)序列分析;
(2)合成或者扩增目的片段亚克隆至目标载体;
(3)报告基因质粒、转录因子共转染细胞;
(4)荧光素酶反应发光;
(5)结果分析。
 
2.2实验例图: 分子互作之核酸与核酸互作
图.双荧光素酶和RIP验证lncRNA可以与miR-26a结合

北京科沿有道生物科技有限公司,专注于生命科学最前沿科研技术服务,具有较好的生物学和医学技术服务平台,能够提供实验课题设计、论文编辑润色,以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
科沿有道秉承“客户为先,服务至上”的经营理念,以一切为了客户的利益为宗旨,努力为广大客户提供最优质、高效的服务,科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任,相信在未来的工作中,科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。
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hjg
  • 本文由 hjg 发表于 2024年12月25日 13:47:41
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